Определение белков и маркеров воспаления на биохимических и иммунохимических анализаторах

Белковые диагностические тесты объединяют в группы по клиническому назначению. От группы зависит диапазон концентраций, а значит, и подходящий метод анализа.

Основные группы белков и маркеров:

Референсные интервалы каждая лаборатория устанавливает для своей тест-системы. Ориентировочные концентрации белков в сыворотке взрослого человека и методы их определения:

В основе всех методов определения белков лежит иммунохимическая реакция, при которой антитела из реагента связываются с определяемым белком-антигеном. От способа регистрации реакции зависят чувствительность метода и стоимость анализа.

При смешивании пробы с раствором антител образуются нерастворимые иммунохимические комплексы, и раствор мутнеет. Фотометр измеряет ослабление прошедшего света, чаще всего на длине волны 340 нм. Чем выше концентрация белка, тем сильнее поглощение.

Так на биохимических анализаторах измеряют:

Для показателей с низкой концентрацией применяют латексное усиление, при котором антитела фиксируют на микрочастицах латекса. Даже малое количество антигена при этом вызывает заметное помутнение, поэтому так определяют ферритин и высокочувствительный СРБ.

Метод не требует дополнительных модулей, поэтому стоимость теста невысокая, а реакция завершается за 5-10 минут. Чувствительность при этом ниже, чем у иммуноферментных систем, и для высокочувствительного тропонина ее недостаточно. Результат может исказить липемия и гемолиз пробы. При очень высокой концентрации антигена возможен постзон-эффект (разновидность эффекта «крюка»), когда избыток белка мешает образованию крупных решетчатых комплексов, и прибор занижает результат. Многие анализаторы распознают избыток белка по характеру нарастания мутности, после чего разводят пробу и повторяют измерение.

Нефелометр регистрирует не ослабление проходящего луча, а свет, рассеянный иммунными комплексами под определенным углом. Слабый сигнал измеряется на темном фоне, поэтому иммунонефелометрия точнее турбидиметрии в области низких концентраций.

Метод применяют для специфических белков с низким содержанием в крови, например свободных легких цепей иммуноглобулинов. Нефелометрию также используют для анализа ликвора и мочи.

В иммуноферментном анализе антитела или антигены помечены ферментом, чаще пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. После отмывки несвязавшихся компонентов в лунку добавляют субстрат, фермент превращает его в окрашенный продукт, и фотометр измеряет оптическую плотность раствора.

Классическим форматом ИФА является 96-луночный планшет. Методом ИФА определяют гормоны и онкомаркеры, а в серологической диагностике с его помощью выявляют специфические антитела к возбудителям инфекций. На ферментной метке построены и многие иммунохимические анализаторы, которые выполняют все этапы анализа без участия лаборанта.

В хемилюминесцентном анализе метка испускает свет при химической реакции, а фотоэлектронный умножитель прибора подсчитывает фотоны. Меткой служат эфиры акридиния или фермент, который расщепляет люминесцентный субстрат. Внешний источник света не нужен, поэтому фоновый сигнал минимален, а нижняя граница определения достигает единиц пикограммов на миллилитр.

Хемилюминесцентный анализ выбирают для маркеров с очень низкой концентрацией, например:

Перечисленные методы реализованы в трех классах приборов, которые различаются назначением и в большинстве современных лабораторий друг друга дополняют.

Эти приборы рассчитаны на большой ежедневный поток проб и измеряют поглощение света в фотометрических реакциях. Производительность анализатора составляет от 100 тестов в час у настольных моделей до 2000 тестов в час у напольных систем крупных лабораторий.

Многие биохимические анализаторы работают с реагентами сторонних производителей. Такие приборы называют открытыми системами. На них лаборатория может добавить новые белковые тесты без покупки еще одного автоматического анализатора.

Такие системы предназначены для исследований с высокими требованиями к чувствительности и специфичности. В них применяют хемилюминесцентную, иммуноферментную или флуоресцентную детекцию. Большинство систем являются закрытыми и используют реагенты только своего производителя.

Нефелометр является специализированным прибором для определения специфических белков. Его выбирают лаборатории с большим объемом иммунологических исследований, а в лаборатории общего профиля эти задачи решает биохимический анализатор.

Сначала определяют, какие тесты будет выполнять лаборатория и сколько проб поступает за день. Дальше уже можно сравнивать конкретные модели.

Основные критерии выбора:

Специалисты компании «ЛАМЕС» помогут подобрать анализаторы для лаборатории под ваше меню тестов и нагрузку, поставят лабораторное оборудование, выполнят его установку и обучат персонал.